环境微生物学实验报告
一、实验目的
（1）了解普通光学显微镜的构造及原理，掌握显微镜的操作及保养方法。（2）观察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。
二、实验器皿与材料
（1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。
（2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。
三、实验步骤
（1）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中央。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调节器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm处时停止旋转。
（3）左眼对着目镜观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，直至目的物清晰。此时找到目的物并移至中央。（4）换成高倍镜，观察目的物，旋转细调节钮，直至视野清晰。（5）观察示范片，绘出其形态图。
四、思考题
（1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？答：为了找到目的物并移动到中央。
（2）要使视野明亮，除采用光源外，还可采取哪些措施？
答：调大孔径光阑，调整光源。如果是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野明亮。
五、生物图
实验二、微生物培养基的配制与灭菌
一、实验目的
（1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。
（2）了解配置微生物培养基的基本原理，掌握配置、分装培养基的方法。（3）学会各类物品的包装、配置（稀释水等）和灭菌技术。
二、实验器皿与材料
（1）实验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。
（2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。
三、实验原理
培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物种类及代谢类型的多样性，因而培养基种类也多，它们的配方及配制方法也各有差异，但一般的配制过程大致相同。
四、实验步骤
1、取100mL蒸馏水倒入锥形瓶；
2、称取牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl0.5g，琼脂20g；3、用100g/LNaOH调节pH至7.2~7.4；4、盖上棉塞，121℃下灭菌15~20min。
五、思考题
1、固体培养基加琼脂后加热溶化时要注意哪些问题？答：（1）加热器功率不能太高，也不能太低。太高，容易沸腾和把培养基烧
焦；太低，培养基容易凝固。
（2）受热要均匀，可以垫上石棉网，要用玻璃棒不停缓慢搅拌。
（3）加热完毕后，要在合适的温度（60℃左右）倒平板，防止凝固。2、培养基中加琼脂的作用是什么？答：琼脂的作用就是让培养基凝固。3、如何检查培养基灭菌是否彻底？
答：将灭菌后的培养基按灭菌锅内不同位置,每处抽取数管标号,置25至30
摄氏度培养一周左右进行检查,若培养基无什么变化说明灭菌效果较好
实验三、细菌的革兰氏染色
一、实验目的
（1）了解细菌的涂片及染色在微生物学实验中的重要性。
（2）学会细菌染色的基本操作技术，从而掌握微生物的一般染色法和革兰氏染色法。
二、染色原理
微生物细胞由蛋白质、核酸等两性电解质及其他化合物组成。所以，微生物表现出两性电解质的性质。两性电解质兼有碱性基和酸性基，在酸性溶液中解离出碱性基，呈碱性带正电；在碱性溶液中解离出酸性基，呈酸性带负电。经测定，细菌等电点（pI）在2~5之间时，大多以两性离子存在，当细菌在中性、碱性或偏酸性溶液中时，细菌带负电荷，所以容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱性染料染色的为多。
微生物体内各结构与染料结合力不同，故可用各染料分别染微生物的各结构以便观察。
三、实验器皿、试剂、材料
（1）器皿：显微镜、接种环、载玻片、酒精灯。
（2）试剂：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、体积分数为95%的乙醇、质量浓度为5g/L的沙黄染色液等。
（3）材料：枯草杆菌、大肠杆菌。
四、实验步骤
（1）涂片：载玻片滴一滴蒸馏水蘸菌染匀（2）初染：用草酸铵结晶紫染液染色1~2min后水洗（3）媒染：用革兰氏碘液染色1~2min后水洗
（4）脱色：滴加体积分数为95%的乙醇，约45s后水洗（5）复染：滴加番红染色2~3min后水洗并干燥（6）镜检：用显微镜观察菌体形态
五、思考题
（1）要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？关键在哪几步？为什么？
答：应注意干燥时不要用火烧太久。关键在于涂片，涂片的时候要注意涂均匀，并且两个菌的量也要差不多，否则太厚的地方脱色就不均匀了。
